曼弗雷德暴跳如雷，想起自己向伊莎贝拉表达感情时，她毫不留情地让他走开。她如此不安，肯定是急着要去见西奥多。这种推测让他感到气愤，再加上刚才她父亲又惹恼了他，因此，他悄悄地朝大教堂跑去。公爵蹑手蹑脚地穿过走廊，借着窗户里透进的微弱月光，听到阿方索墓那边传来断断续续的低语声，就悄悄朝那边走去。他听清的第一句话是：
"难道，哎呀！取决于我吗？曼弗雷德永远不会同意我们结婚的。"
"对，这样就可以阻止了！"这个暴君叫着，拔出短剑，从说话人的肩膀上方朝她的胸膛刺去。
"啊，我被杀死了！"玛蒂尔达叫着倒了下去，"上帝啊，接受我的灵魂吧！"
"畜生，野兽，你要干什么？"西奥多叫着冲了上去，一把夺下了他手里的短剑。
"住手，松开你不敬的手！"玛蒂尔达叫道，"那是我的父亲！"
曼弗雷德仿佛刚从噩梦中醒来，一会儿捶着自己的胸脯，一会儿扯着自己的头发，然后用尽力气想从西奥多手里夺回那柄短剑，来结束自己的生命。西奥多不知所措，只是满怀悲痛地照顾着玛蒂尔达。听到他的呼救声，一些修道士跑出来帮忙。他们有的帮着伤心的西奥多一起为奄奄一息的小姐止血，有的则努力制止曼弗雷德伤害他自己。
玛蒂尔达坦然接受了自己的命运，用充满爱意的目光注视着西奥多，感谢他的一份深情。她竟然恳求正在救他的人去安慰她的父亲。
这时，杰罗姆听到了这个致命的消息，也来到了教堂。他的脸色似乎在责备西奥多，可又转向了曼弗雷德，他说："现在，暴君，看到报应在你身上实现了吧！阿方索的血脉向上帝呼唤复仇，上帝已经准许暗杀来玷污它的圣坛，你可以让自己的鲜血流在这位公爵的墓前！"